Equipo para pruebas de HPLC


Cuando los investigadores descubren avances científicos utilizando la química analítica, disponer del equipo adecuado es indispensable para los resultados. Las pruebas de HPLC requieren equipo especializado compatible con su analito. Para decidir qué equipo químico necesita para su laboratorio analítico, primero debe confirmar su metodología en base a la composición del material de su muestra. Las técnicas de HPLC pueden refinarse para satisfacer sus necesidades específicas, y con una comprensión profunda de la cromatografía usted puede desarrollar un flujo de trabajo fiable.

La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es una técnica analítica útil para compuestos químicos, como pequeñas moléculas o biopolímeros. Esta técnica incluye estudiar una muestra que está disuelta en una solución, que posteriormente se inyecta en una columna con resina que interactuará con la muestra. La interacción ralentiza el movimiento de la muestra a través de la columna, donde es detectada. Se obtienen datos del tiempo de movimiento de la muestra y la intensidad de detección de la muestra.

Para obtener más información sobre los usos de la HPLC, visite nuestra página de soluciones de cromatografía. Avantor ofrece una amplia selección de recursos y productos para asistirle en sus necesidades.

Cromatografía líquida de alto rendimiento

En palabras sencillas, la cromatografía líquida de alto rendimiento funciona en base al principio que cada uno de los componentes tiene un comportamiento diferente en agua. La HPLC separa y purifica los compuestos en función de su polaridad, o sus propiedades hidrofóbicas/hidrofílicas.

Hay dos tipos de cromatografía; de fase normal y de fase inversa Las diferentes composiciones de resina en la columna determinan el tipo de cromatografía que se utiliza y qué moléculas pueden separarse.

Fase normal

En este método, la columna se llena con partículas de sílice polar y un tampón no polar. Una vez se ha inyectado la muestra, las partículas polares se adherirán al sílice, mostrando un tiempo de retención más largo que las moléculas no polares.

Fase inversa

La columna se llena con partículas hidrofóbicas con un tampón polar cuando se lleva a cabo la cromatografía de fase inversa. Las moléculas hidrofóbicas se adhieren a la resina más tiempo y se pueden detectar con mayor facilidad.

Uso de productos químicos para la preparación de muestras de laboratorio

Hay tres procesos principales a la hora de configurar una muestra para una prueba de HPLC: dilución, centrifugación y filtración. Cada paso requiere diferentes productos químicos, cuya planificación correcta puede minimizar los gastos y optimizar su protocolo. Es fundamental seleccionar los productos químicos adecuados para la preparación de la muestra, dado que esto ayuda a reducir tiempo, dinero y recursos de su laboratorio.

Dilución

La clave de la dilución adecuada de una muestra es determinar qué productos químicos funcionan mejor para el metabolito que le interesa. Un disolvente puede ser compatible con una clase de productos químicos, y resultar perjudicial para otra. Para esto se suelen seleccionar agua u otros disolventes. Por ejemplo, los disolventes orgánicos como el metanol o el acetonitrilo se utilizan para aplastar las proteínas y extraer pequeñas moléculas a la vez.

Centrifugación

Este paso ayuda a conservar su equipo de pruebas a la vez que protege la calidad de su muestra durante la filtración. La centrifugación deja caer cualquier partícula suspendida en el fondo del tubo de la muestra utilizando un movimiento de agitación potente para mezclar la solución.

Se recomienda mezclar una muestra durante 5 minutos a máxima velocidad con una centrífuga de sobremesa. Esto minimizará los desperdicios cuando se recuperen las muestras filtradas y reducirá el uso de suministros de filtración caros que a menudo necesitan mayores tiempos de filtrado. Aunque la centrifugación no requiere productos químicos adicionales, reduce notablemente la cantidad necesaria en otros pasos.

Filtración

Por un laboratorio analítico pueden pasar cientos de muestras cada semana que requieren resultados rápidos y precisos. Este equilibrio entre el ritmo y la calidad se ve profundamente afectado por las técnicas de filtración.

La filtración es importante para la preparación correcta de la muestra de HPLC por dos motivos principales: proteger la bomba de las partículas del disolvente y prevenir que las partículas atasquen o dañen la columna para HPLC.

El uso de disolventes premezclados y filtrados puede minimizar el potencial de contaminación del disolvente. Este nivel de pureza ayudará a reducir el mantenimiento necesario para su equipo. La adición de un paso de filtración previo a la carga de su muestra en la columna o en el momento de su recogida puede reducir errores causados por la contaminación y proteger su equipo del desgaste a largo plazo.

Seleccionar productos químicos para la preparación de la muestra de HPLC

A la hora de establecer una técnica eficiente para la preparación de la muestra de HPLC, es crucial utilizar productos químicos purificados que tengan las reacciones necesarias con los compuestos que desea testar.

Los disolventes como el acetonitrilo, el metanol y el agua suelen utilizarse en la preparación de muestras para su filtración. Se controla la calidad de algunos de los mejores disolventes para el análisis de HPLC en lo relativo a la transparencia en el espectro UV para ofrecer una perfecta sensibilidad y se les despoja de impurezas metálicas que a menudo afectan a la actividad biológica dentro de su muestra.

Disponer de los productos químicos de filtración adecuados mejorará la velocidad de las pruebas y a menudo eliminará la necesidad de equipo y recursos adicionales para seguir filtrando una muestra con tendencia a la contaminación.

Selección de disolventes para evitar la contaminación

La elección de las soluciones químicas adecuadas puede ser clave para evitar contaminantes en su muestra de HPLC que sesgarían los resultados de la prueba y dañarían su equipo. Los extraíbles son compuestos liberados de un componente, como una membrana del filtro que está en contacto con el disolvente de la muestra. La cantidad de extraíbles varía en función de la resistencia del componente al disolvente, así como en función de las temperaturas y presiones.

Los extraíbles pueden afectar a la precisión de la HPLC interfiriendo con el análisis si pueden detectarse con un método analítico descendente. Estos compuestos introducen datos de ruido, reduciendo la calidad general de los datos. Esto puede ser especialmente problemático si el analito objetivo tiene el mismo tiempo de retención que la extractabilidad.

La confirmación de que la membrana de filtración tiene una elevada compatibilidad química con los disolventes de fase móvil puede reducir notablemente los extraíbles.

Las membranas de politetrafluoroetileno (PTFE), difluoruro de polivinilideno (PVDF) y de celulosa regenerativa (RC) son elecciones populares, dado que son muy compatibles con los disolventes comunes de fase móvil. El agua purificada, el acetonitrilo y el metanol son disolventes que se eligen a menudo.

Otro modo de prevenir la contaminación es reducir la variación transversal de materiales en el laboratorio. El estandarizado de dos tipos de membrana y el uso de diversos formatos ayudará a mantener la consistencia en el laboratorio.

Puede utilizar los mismos materiales de membrana en los círculos de membrana para la filtración de la fase móvil, filtros de jeringa para la preparación manual y filtros sin jeringa para la filtración automática. Esto se traducirá en una reducción del número de consumibles que debe tener en stock, lo que minimizará el espacio necesario y la molestia de volver a proveerse de una serie de diversos suministros.

Obtenga más información acerca del equipo para HPLC y todos los recursos para pruebas analíticas a través de Avantor.®.

Conclusión

Debería simplificarse la provisión de los equipos para HPLC que permitan un procesamiento a gran escala o la investigación de vanguardia. Avantor® ofrece productos y herramientas de recursos de alta calidad para ayudar al éxito de su laboratorio.

La manipulación correcta de los productos químicos de laboratorio para HPLC es también un aspecto importante que tener en cuenta a la hora de proveerse de un equipo y mantener el control de calidad. Para obtener más información sobre la manipulación de productos químicos comunes de laboratorio, visite nuestra página sobre Productos químicos de laboratorio y sus Usos.

Avantor® le puede proporcionar todo el equipo y químicos que necesita.